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电泳分类

发表时间:2019-10-24 00:00

区带电泳

是在一定的支持物上,在电场作用下,在均一的缓冲液体系,样品中带正或负电荷的离子分别向负或正极以不同速度移动,分离成一个个彼此隔开的区带。这是当前应用最广泛的电泳技术。区带电泳按支持物的物理性状不同,又可分为纸和其他纤维膜电泳、淀粉电泳、凝胶电泳。

等电点聚焦电泳

凝胶中加入两性电解质,在电场强度下形成PH梯度。样品在电泳中,环境PH大于其PI时带负电荷,向正极移动,环境的PH小于其PI时带正电荷,向负极移动,当泳动到其自身特有的等电点时,其净电荷为零,泳动速度下降到零,具有不同等电点的物质最后聚焦在各自等电点位置,形成一个个清晰的区带,分辨率极高。

电泳技术方法

电泳种类很多,电泳的原理基本相同,但不同的支持物或凝胶又有各自的特点。

1 纸电泳

2 薄层电泳

3 薄膜电泳

4 琼脂糖凝胶电泳

5 聚丙烯酰胺凝胶电泳

6 毛细管电泳

薄膜电泳

以醋酸纤维制成的薄膜作为支撑体的电泳称为薄膜电泳。 醋酸纤维是纤维素的醋酸酯,由纤维素的羟基经乙酰化而成。 将之溶于丙酮等有机溶剂中,即可涂布成均一细密的微孔薄膜, 厚度约以0.1-0.15mm为宜。 醋酸纤维素薄膜与滤纸相比较,有以下优点:

1.分离效果好。对蛋白质样品吸附极少,无拖尾现象,染色后背景能完全脱色,各种蛋白质染色带分离清晰,因而提高了定量测定的精 确性。

2.快速省时。由于亲水性较滤纸小,电渗作用小,电泳时大部分电流是由样品传导的,所以分离速度快,电泳时间短,一般电泳45-60min即可,加上染色、脱色,整个电泳完成仅需90min左右。

3.灵敏度高,样品用量少。血清蛋白电泳仅需2μL血清,故常用于检测在病理情况下微量异常蛋白的改变。

4.应用面广。某些蛋白在纸上电泳不易分离,如胎儿甲种球蛋白、溶菌酶、胰岛素、组蛋 白等用醋酸纤维素薄膜电泳能较好地分离。

5.易保存,易定量。醋酸纤维素薄膜电泳染色后,经冰乙酸、乙醇混合液或其他溶液浸泡 后可制成透明的干板,有利于扫描定量及长期保存。

由于醋酸纤维素薄膜电泳操作简单、快速、价廉。目前已广泛用于分析检测血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、酶、多肽及其他生物大分子。

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醋酸纤维素薄膜电泳

1.仪器: 中低压电源、 DYCP-38C电泳槽 、WD-9404型超级加样器

2.试剂: (1)pH8.6 巴比妥缓冲液:二乙基巴比妥酸,二乙基巴比妥 钠;

(2)染色液:丽春红S ,三氯乙酸;

(3)漂洗液:95%乙醇,冰醋酸 ;

(4)透明液:无水乙醇,冰醋酸。

3、介质:醋酸纤维素薄膜,7×9cm等

醋酸纤维素薄膜电泳注意事项:

1.粗糙面点样. 1-2μl为宜

2.恒流电泳:电流强度0.4~0.6mA/cm

3.pH8.6 巴比妥缓冲液(离子强度0.06)

4.染色5min即可

5.固定保存:将干燥的电泳图谱膜条放入透明液中浸泡10–15分钟后,取出贴于洁净玻璃板上,干燥后,即为透明薄膜图谱。

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